جزوات رنگی و تایپ شده انگل شناسی
دکتر عدنانی پیام نور جزوه انگل شناسی
– ليوان يكبار مصرف معرف هاي لازم و طرز تهيه آنها:
– سرم فيزيولوژي: 5/8 – ( ٪ ): – ٪: ٪ – : :
-٪ – – – ()
– :
— ()
: : =‐‐:
/(/) ()//
:
– % () “- /- /% /()
– — “- () – ×
– (×) – (×) /- “:
-% % – – – – :
ممكن است متلاشي شده و يا شكل طبيعي خود را از دست بدهد.
اگر از روش شناور سازي، به عنوان تنها روش تشخيصي استفاده ميكنيد،بايد سطح مايع و رسوب آن را بررسي كنيد تا مطمئن شويد همه ارگانيسمها را جـدا نمـوده وتشـخيص مـي دهيـد. بـه هـر حـال روش تغلـيظ فرمـالين – اتيـل استات(اتر)به عنوان بهترين جزوه انگل شناسی جهت جدا سازي و تشخيص تخم كرمها ،كيست،تك ياختـه هـا و غيـره مـي باشد.
رنگ آميزي تري كروم در انگل شناسي Trichrome staining
خلاصه: در بعضي مواقع خصوصا” در مورد نمونه هاي ديسانتري كه چندين ساعت از دفع آن گذشته باشد يا ساير آميب هايي كه در محيط هاي كشت اختصاصي رشد مي كنند، با موارد مشكوكي برخورد مي شود كه براي تشخيص قطعي جهت بررسي خصوصيات هسته، نحوه آرايشات كروماتيني جدار هسته، اندازه وموقعيت كاريوزوم، نياز به رنگ آميزي تري كروم دارد.
معرف هاي لازم و طرز تهيه آنها:
– رنگ تري كروم:
به 6/0 گرم كروموتروپ 2R ، 15/0 گرم لايت گرينSF ، 15/0 گرم فست گرين، 7/0 گرم اسيد فسفو تنگستيك مقدار يـك ميلـي ليتـر اسـيداستيك گلاسيال اضافه نموده و پس از 45-30 دقيقه حجم آنرا با آب مقطر به 100ميلي ليتر مي رسانيم.
– فيكساتيو بوآن: 30 حجم اسيد پيكريك اشباع + 10 حجم فرمالين تجارتي + 2 حجم اسيد استيك گلاسيال .
– اسيد الكل :100 ميلي ليتر الكل ˚96 + 100 ميكرو ليتر اسيد استيك گلاسيال .
ساير مواد و وسايل اختصاصي مورد نياز:
– الكل ˚70 – الكل ˚90 – الكل مطلق
-گزيلل – چسب كانادا بالزام – سرم اسب يا آلبومين
– لامل 20×40 – جار رنگ آميزي – روغن ايمرسيون روش انجام آزمايش :
1 – به مقداري از سوسپانسيون نمونه يك يا دو قطره سرم اسب (جهت ايجاد چسبندگي نمونه با سطح لام) افزوده و پس از يكنواخت كردن سوسپانسيون ،توسط يك لام، گسترش نازكي مشابه آنچه كه براي تهيه لام نازك خون انجام مي گيرد، تهيه و قبل از خشك شدن گسترش ،آنرا در فيكساتيو بوآن بمدت 15 دقيقه قرار ميدهيم. لازم به توضيح است كه درتمام مراحلي كه در زير آمده هيچگونه شستشويي وجود نداشته و گسترش در هيچيك از مراحل نبايد خشك شود.
2 – پس از اتمام زمان فيكساسيون ، گسترش را به الكل ˚70 جزوه انگل شناسی 2-1 دقيقه انتقال مي دهيم . گسترش را در اين حالت مي توان براي مدت نامحدود نگهداري و در فرصت ديگري مراحل رنگ آميزي را ادامه داد .
انگل شناسی
3 – گسترش را در رنگ تري كرومبمدت 15-10 دقيقهقرار مي دهيم.
4 – گسترش رادر اسيد الكلبمدت 5- 3 جزوه زیست شناسی جانوری رنگ زدايي قرار مي دهيم.
5 – گسترش را به الكل ˚ 96بمدت 5 -3 دقيقهانتقال مي دهيم (جهت آبگيري).
6- ادامه مرحله آبگيري با قرار دادن گسترش در الكل مطلقبمدت 5-3 دقيقه.
7- تكرار مرحله آبگيري با قرار دادن گسترش در جار الكل مطلقديگربمدت 5-3 دقيقه.
8- در آخرين مرحله گسترش را در گزيللبمدت 3-2 دقيق هقرار مي دهيم
9 – بمحض خارج كردن گسترش از گزيلل و قبل از خشك شدن گزيلل ، يك قطره چسب كانادا بالزامروي گسترش مي ريزيم و لامل را با دقت بطوريكه حباب هوا بين لام و لامل تشكيل نشود روي لام قرار مي دهيم .
پس از خشك شدن چسب،گسترش آماده براي بررسي ميكروسكوپي با عدسي 100 و روغن ايمرسيوناست .
كشت نمونه هاي مدفوع در بخش انگل شناسي
خلاصه:به منظور تبديل كيست ها به تروفوزوئيت و نيز به منظور نگهداري تروفوزوئيت ها و تكثير آنها كشت نمونه ها در محيط كشت سرم منعقده اسب (HSr+s) توصيه مي شود. اين محيط كشت دي فازيـك و گزنيـكمي باشد. كه در ادامه جزئيات ساخت و نحوه كار با آن توضيح داده مي شود.
– محيط كشت اصلاح شده سرم اسب، رينگر و نشاسته برنج (HSr+s)
/:
+(+) – – (“) – ()
– () – – – – : ( () ، () ، (((()
– – – – ˚- – – – :
– :˚-“() ˚( -) – ::
() () /((/((/كامل pH آنرا روي 4/7- 2/7 تنظيم مي كنيم (در صـورت نيـاز بـهتنظيم pH ميتوان ازNaOH 40٪ استفاده نمود.) و قبل از استفاده با اتوكلاو آنرا استريل مي كنيم.
3 – نشاسته برنج: نشاسته برنج بصورت تجارتي موجود مي باشد تنها قبل از استفاده آنرا در لوله هاي درب پيچدار توسط اتوكلاو استريل مي كنيم ،ميزان مصرف آن براي هر ميلي ليتر فاز مايع مقدار3-2 گرم
ميباشد. (مصرف زيادي نشاسته باعث مرگ آميب مي گردد.)
4- استرپتومايسين سولفات :براي جلوگيري از رشد بيش از حد باكتري هـا از ايـن آنتـي بيوتيـك اسـتفاده مـيشود. اين آنتي بيوتيك بصورت ويال از داروخانه تهيه واز پودر خشك آن بميـزان 500-250 ميكروگـرم بـهازاي هر ميلي ليتر فاز مايع به محيط كشت اضافه مي شود.
روش انجام كشت:
1- ابتدا لوله فاز جامد و رينگر را از يخچال خارج مي جزوه انگل شناسی تا دمـاي آن بـه دمـاي اتـاق برسـد. و مشخصـاتنمونه را بر روي لوله فاز جامد ثبت مي كنيم.
2- در كنار شعله, فاز مايع (رينگر) را به لوله محيط كشت اضافه مي كنيم بطوريكه كاملا”روي فاز جامد را بپوشاند، سپس مقدار 3-2 ميلي گرم نشاسته برنج و 2-1 ميلي گرم استرپتومايسين سولفات با ته پي پت پاستور استريل به آن مي افزاييم .
3- 30 تا 50 ميلي گرم از نمونه مدفوع يا 5/0 ميلي ليتر از مدفوع ديسانتري يا سوسپانسيون مدفوع در رينگر را
، در شرايط استريل به لوله كشت اضافه مي كنيم.
4- محيط كشت را براي مدت 48 ساعت در دماي C˚ 37-5/35 انكوبه مي كنيم.
روش بررسي و پاساژ آميب :
پس از 48 ساعت انكوباسيون ، با كمك پي پت پاستور استريل يك قطره از رسوب ته محيط كشت را در كنار شعله برميداريم وپس از تهيه لام در زير ميكروسكپ به مطالعه آميب هاي متحرك تكثير يافته مي پردازيم. در () //() “
فهرست مطالب