جزوه ویروس شناسی علوم ازمایشگاهی
مردی پیر و عینکی که کت و شلواری پوشیده و روی نیمکتی کنار پنجره بزرگی نشسته است. نیمکت با بطری های کوچک و [1] (-) [2] : [3] – [4]
[5] () ً [3] ()، [6]
[7] (ً ) )، -‘()، [8][9]
[10] [11]
[12] [13] 
[15] [16] [17] [18] – ً [19]
[20] ( ) [ 21] [22] [23] [24] [25]
: [26] [27] [28]
()
؛ ؛ میکروسکوپ های الکترونی به دست می آید تا 10000000 برابر است [29] در حالی که بالاترین بزرگنمایی قابل دستیابی با میکروسکوپ های نوری حدود 1500 برابر است. [30]
ویروس شناسان اغلب از رنگ آمیزی منفی برای کمک به تجسم ویروس ها استفاده می کنند. در این روش، ویروس ها در محلولی از نمک های فلزی مانند استات اورانیوم معلق می شوند. اتم های فلز نسبت به الکترون ها مات هستند و ویروس ها به صورت معلق در پس زمینه تاریک اتم های فلز دیده می شوند. [29] این تکنیک از دهه 1950 مورد استفاده قرار گرفته است. [31] بسیاری از ویروس ها با استفاده از این روش کشف شدند و میکروسکوپ الکترونی رنگ آمیزی منفی هنوز یک سلاح ارزشمند در زرادخانه ویروس شناس است. [32]
میکروسکوپ الکترونی سنتی دارای معایبی است که ویروس ها با خشک شدن در خلاء زیاد داخل میکروسکوپ الکترونی آسیب می بینند و پرتو الکترونی خود مخرب است. [29] در میکروسکوپ الکترونی برودتی ، ساختار ویروس ها با قرار دادن آنها در محیطی از آب شیشه ای حفظ می شود . [33] این امکان تعیین ساختارهای زیست مولکولی در وضوح نزدیک به اتمی را فراهم می کند، [34] و توجه گسترده ای را به رویکرد به عنوان جایگزینی برای کریستالوگرافی اشعه ایکس یا طیف سنجی NMR برای تعیین ساختار ویروس ها جلب کرده است. [35]
میکروگراف کرایوالکترون یک روتاویروس
رشد فرهنگ ها
ویروسها انگلهای داخل سلولی اجباری جزوه ویروس شناسی علوم ازمایشگاهی و چون فقط در داخل سلولهای زنده میزبان تکثیر میشوند، برای رشد آنها در آزمایشگاه به این سلولها نیاز است. برای ویروس هایی که حیوانات را آلوده می کنند (معمولاً “ویروس های حیوانی” نامیده می شوند) از سلول های رشد یافته در کشت سلولی آزمایشگاهی استفاده می شود. در گذشته از تخم مرغ های بارور استفاده می شد و ویروس ها روی غشای اطراف جنین رشد می کردند. این روش 
”” ”” “” “” [40]
ً () [41] [42] [43] (). [44]
[45]
() [46] [47]”درمان” باید تا 21 روز به تعویق بیفتد تا نوکلئیک اسید ویروسی باقیمانده از محل پاک شود. عفونت [48]
تست های تشخیصی
در آزمایشگاهها، بسیاری از تستهای تشخیصی برای تشخیص ویروسها، روشهای تقویت اسید نوکلئیک مانند PCR هستند. برخی از آزمایشها ویروسها یا اجزای آنها را شناسایی میکنند، زیرا این موارد شامل میکروسکوپ الکترونی و آنزیم-ایمونواسی میشود . ابزارهای به اصطلاح “خانه” یا “خودآزمایی” معمولاً تست های جریان جانبی هستند که ویروس را با استفاده از یک آنتی بادی مونوکلونال برچسب گذاری شده شناسایی می کنند . [49] اینها همچنین در کشاورزی، غذا و علوم زیست محیطی استفاده می شوند. [50]
کمیت و بارهای ویروسی
مقاله اصلی: تعیین کمیت ویروس
شمارش ویروس ها (کمی سنجی) همیشه نقش مهمی در ویروس شناسی داشته است و در کنترل برخی از عفونت های انسان که در آن بار ویروسی اندازه گیری می شود، مرکزی شده است. [51] دو روش اساسی وجود دارد: روشهایی که ذرات ویروسی کاملاً عفونی را شمارش میکنند که به آنها سنجش عفونی میگویند و روشهایی که تمام ذرات از جمله ذرات معیوب را میشمارند. [29]
سنجش عفونت
پلاک ها در سلول ها باعث ایجاد ویروس هرپس سیمپلکس می شوند. سلول ها ثابت شده و به رنگ آبی رنگ آمیزی شده اند.
سنجش عفونی میزان (غلظت) ویروس های عفونی را در نمونه ای با حجم مشخص اندازه گیری می کند. [52] برای سلول های میزبان، از گیاهان یا کشت سلول های باکتریایی یا حیوانی استفاده می شود. حیوانات آزمایشگاهی مانند موش نیز به ویژه در ویروس شناسی دامپزشکی مورد استفاده قرار گرفته اند. [53] اینها سنجشهایی هستند که یا در مواردی که نتایج در مقیاس پیوسته هستند یا کمی هستند، جایی که رویدادی رخ میدهد یا رخ نمیدهد. سنجش های کمی مقادیر مطلق و سنجش های کمی یک احتمال آماری مانند حجم نمونه آزمایشی مورد نیاز برای اطمینان از آلوده بودن 50 درصد از سلول های میزبان، گیاهان یا حیوانات را نشان می دهد. این دوز عفونی متوسط یا ID 50 نامیده می شود . [54]باکتریوفاژهای عفونی را می توان با کاشت آنها در “چمنزار” باکتری در ظروف کشت شمارش کرد. هنگامی که در غلظت های پایین، ویروس ها سوراخ هایی در چمن ایجاد می کنند که می توان جزوه ویروس شناسی علوم ازمایشگاهی را شمارش کرد. سپس تعداد ویروس ها به صورت واحدهای تشکیل دهنده پلاک بیان می شود . برای باکتریوفاژهایی که در باکتریهایی که نمیتوانند در کشتها رشد کنند، تکثیر میشوند، از سنجش بار ویروسی استفاده میشود. [55]
ایمونوفلورسانس: سلول های آلوده به روتاویروس (بالا) و سلول های غیر آلوده (پایین)
سنجش فوکوس تشکیل (FFA) نوعی از سنجش پلاک است، اما به جای تکیه بر لیز سلولی برای تشخیص تشکیل پلاک، FFA از تکنیکهای رنگآمیزی ایمنی با استفاده از آنتیبادیهای برچسبدار فلورسنت خاص برای یک آنتیژن ویروسی استفاده میکند.برای شناسایی سلول های میزبان آلوده و ذرات ویروس عفونی قبل از تشکیل پلاک واقعی. FFA مخصوصاً برای تعیین کمیت دستههایی از ویروسهایی که غشاهای سلولی را لیز نمیکنند مفید است، زیرا این ویروسها برای سنجش پلاکها قابل قبول نیستند. همانند روش سنجش پلاک، تک لایههای سلول میزبان با رقتهای مختلف نمونه ویروس آلوده میشوند و اجازه داده میشوند تا برای یک دوره انکوباسیون نسبتاً کوتاه (مثلاً 24 تا 72 ساعت) در زیر یک محیط پوشش نیمه جامد که انتشار ویروس عفونی را محدود میکند، انکوبه شود و باعث ایجاد موضعی شود. خوشه ها (کانون) سلول های آلوده. صفحات متعاقبا با آنتی بادی های نشاندار شده با فلورسنت علیه یک آنتی ژن ویروسی بررسی می شوند و از ) / [56] : ()، ً [57] [58] [59] [60]
() “” [61]
های میزبان حذف کنند. روش های مورد استفاده اغلب دارای مزیت متمرکز کردن ویروس ها هستند که بررسی آنها را آسان تر می کند.
سانتریفیوژ
سانتریفیوژها اغلب برای تصفیه ویروس ها استفاده می شوند. سانتریفیوژهای کم جزوه ویروس شناسی علوم ازمایشگاهی ، یعنی. آنهایی که حداکثر سرعت 10000 دور در دقیقه (rpm) دارند به اندازه کافی برای متمرکز کردن ویروسها قدرتمند نیستند، اما اولتراسانتریفیوژهایی با حداکثر سرعت حدود 100000 دور در دقیقه قدرت دارند و این تفاوت در روشی به نام سانتریفیوژ دیفرانسیل استفاده می شود . در این روش آلایندههای بزرگتر و سنگینتر با سانتریفیوژ با سرعت کم از مخلوط ویروس حذف میشوند. ویروس ها که کوچک و سبک هستند و در حالت تعلیق باقی می مانند، سپس با سانتریفیوژ با سرعت بالا متمرکز می شوند. [62]
پس از سانتریفیوژ دیفرانسیل، سوسپانسیون های ویروسی اغلب با زباله هایی که دارای ضریب رسوب یکسانی هستند آلوده می مانند و با این روش حذف نمی شوند. در این موارد از اصلاح سانتریفیوژ به نام سانتریفیوژ چگالی شناور استفاده می شود. در این روش ویروسهای بازیابی شده از سانتریفیوژ دیفرانسیل مجدداً با سرعت بسیار بالا به مدت چند ساعت در محلولهای متراکم از قندها یا نمکها سانتریفیوژ میشوند که یک گرادیان چگالی از کم به زیاد را در لوله در طول سانتریفیوژ تشکیل میدهند. در برخی موارد، از گرادیان های از پیش ساخته شده استفاده می شود که محلول هایی با چگالی به طور پیوسته کاهش می یابند که به دقت روی یکدیگر قرار می گیرند. مثل یک شی در دریای مردهبا وجود نیروی گریز از مرکز، ذرات ویروس نمیتوانند در محلولهایی غوطهور شوند که چگالتر از آن هستند و لایههای مجزایی از ویروسهای غلیظ اغلب قابل مشاهده در لوله را تشکیل میدهند. کلرید سزیم اغلب برای این محلولها ً [61] [63]
ً [64]